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Autoria: Hospital Universitário Maggiore della Carità, Novara, Itália (G. Faolotto, P. Ravanini); Universidade de Uppsala, Uppsala, Suécia (A. Wasberg, J. Ling, Å. Lundkvis); Universidade de Helsinque, Helsinque, Finlândia (R. Iheozor-Ejiofor, EM Korhonen, T. Sironen, R. Joensuu, O. Vapalahti, E. Huhtamo); Universidade do Piemonte Oriental, Novara (R. Minisini); Universidade de Helsinque e Hospital Universitário de Helsinque, HUSLAB, Helsinque (O. Vapalahti)
Na Europa, os vírus endémicos transmitidos por roedores incluem os hantavírus do Velho Mundo (Hantaviridae) e o vírus da coriomeningite linfocítica (LCMV; Arenaviridae) (1). Vírus Puumala (PUUV), transmitido pela ratazana comum (Clethrionomys glareolus), é o hantavírus mais comum na Europa. No Sudeste da Europa e nos Balcãs, o vírus Dobrava-Belgrado (DOBV) em ratos de pescoço amarelo (Apodemus flavicollis) e vírus Saaremaa em ratos de campo listrados (A. agrário) também estão presentes (1). Estas espécies de ratos e outras espécies de reservatórios potenciais, como Músculo de rato rato e O rato da Noruega ratos, são comuns no norte da Itália, incluindo as regiões discutidas neste artigo (2).
DOBV e PUUV causam febre hemorrágica com síndrome renal (HFRS) e LCMV transmitidos por camundongos domésticos (M. músculo), pode causar doença febril ou meningite asséptica (1). Ao contrário de muitos países vizinhos, as infecções transmitidas por roedores não são frequentemente diagnosticadas em Itália, embora haja evidências de circulação de LCMV e DOBV e exposição humana (2–6). Este estudo teve como objetivo determinar evidências sorológicas de hantavírus e exposição ao LCMV no noroeste da Itália, uma região onde esses vírus não foram extensivamente estudados.
As amostras do estudo (n = 371, idade média de 59,9 anos) foram coletadas em 2004-2018 para outros estudos nas províncias de Novara, Biella, Vercelli e Verbano Cuzio-Osola (Figura) e incluíram pacientes com diversas doenças crônicas, incluindo patologias nefrológicas, abuso de álcool, infecção pelo vírus da hepatite C e doenças hepáticas. Todos os pacientes forneceram consentimento informado por escrito e o estudo foi aprovado pelo comitê de ética local. Em 2018, selecionamos amostras de plasma de pacientes para PUUV, DOBV e LCMV IgG usando um ensaio de imunofluorescência (IFA), conforme descrito anteriormente (2). Para determinar ainda mais a especificidade do anticorpo contra hantavírus, testamos anticorpos neutralizantes em 2024 e 2025 contra PUUV e DOBV para amostras com títulos de IgG> 1:40 em DOBV ou PUUV IgG IFA.
Realizamos ensaios de neutralização por redução de foco (FRNT) em células Vero E6 de acordo com protocolos publicados anteriormente (7,8). Resumidamente, incubamos células Vero E6 com amostras de plasma diluídas em série e hantavírus (50 unidades de focagem/poço) em placas de 24 poços. Após a adsorção, revestimos as células com MEM-agarose e incubamos por 8 a 10 dias, dependendo do vírus. Detectamos focos por imunocoloração com anticorpo monoclonal específico para hantavírus e anticorpo secundário conjugado com peroxidase de rábano visualizado com substrato AEC (3-amino-9-etilcarbazol). Determinamos títulos neutralizantes com base na redução de focos em relação aos controles apenas de vírus; usamos uma redução de 80% em relação ao controle negativo como ponto de corte para maior especificidade.
Dos 371 pacientes, 27 (7,3% (95% Wilson CI 5,0%–10,4%)) foram positivos para hantavírus IgG por IFA (títulos 1:20–1:640) (Tabela 1). Testamos ainda 11 com títulos >1:40 por FRNT e encontramos atividade neutralizante de PUUV em 10/11 das amostras testadas (títulos 1:80 a >1:320). A neutralização do DOBV costuma ser menor (títulos <1:40 a 1:80). Várias amostras mostraram neutralização específica de PUUV com atividade neutralizante mínima ou nenhuma atividade neutralizante de DOBV (Tabela 2). Para LCMV, 10 de 371 pacientes (2,7% (95% Wilson IC 1,5% –4,9%)) foram IgG positivos (títulos 1:20 a 1:40) (Tabela 1). Os casos soropositivos estavam dispersos geograficamente (Figura) e anticorpos contra ambos os vírus foram detectados apenas na região de Novara.
Este estudo detectou anticorpos contra hantavírus e arenavírus em pacientes de uma região anteriormente não estudada do noroeste da Itália. As infecções por hantavírus são notificadas rotineiramente em países vizinhos, mas raramente diagnosticadas em Itália; foram notificados casos anuais em França, Áustria e Eslovénia (9). A prevalência sorológica de LCMV (2,7%) corresponde a relatos anteriores da região de Trentino (2). Nossa soropositividade para hantavírus (7,3%) foi superior aos 0,2% de DOBV IgG relatados para trabalhadores florestais em Trentino em 2002 (2) e acima da média estimada de 1,7% na população geral da Itália (10). Uma prevalência sorológica mais alta (até 8,8%) foi relatada em grupos de risco de roedores expostos ocupacionalmente (5).
Os resultados de IFA indicaram que as amostras de plasma foram positivas para PUUV ou DOBV IgG; no entanto, o FRNT demonstrou atividade neutralizante predominantemente específica do PUUV, sugerindo o PUUV como o provável vírus infectante. A neutralização contra o DOBV estava ausente ou detectada em títulos baixos, consistente com a reatividade cruzada sorológica e não com a infecção real pelo DOBV. Apenas 1 amostra (S52) apresentou reatividade aos antígenos PUUV e DOBV por IFA e apresentou perfil de neutralização misto. Este achado pode indicar exposição a hantavírus antigenicamente relacionado ou a presença de anticorpos com reação cruzada. As respostas de anticorpos neutralizantes cruzados entre hantavírus foram documentadas em amostras de pacientes convalescentes agudos e tardios, complicando potencialmente a interpretação sorológica. Embora a exposição dupla ao PUUV e ao DOBV não possa ser excluída, os resultados serológicos não permitem uma distinção definitiva entre estas possibilidades.7,11)
A primeira limitação do nosso estudo é que a amostragem única exclui o momento da infecção e a associação dos sintomas com a soropositividade. Dado que as amostras foram recolhidas de pessoas com doenças crónicas, os resultados podem não representar totalmente a população em geral e os dados sobre factores de risco, residência e histórico de viagens não estão disponíveis. Viver numa grande área urbana como Milão pode opor-se à transmissão local; no entanto, as condições crónicas dos pacientes e o acompanhamento regular no hospital universitário regional apoiaram principalmente a exposição local ou regional. Além disso, a representação geográfica é desigual; a maioria dos pacientes residia na área de Novara, alterando potencialmente a distribuição espacial dos casos soropositivos.
No geral, não encontramos nenhuma associação clara entre os achados sorológicos e o grupo de pacientes, local ou horário da amostragem. A maioria dos pacientes soropositivos para hantavírus eram homens com idade entre 36 e 88 anos, consistente com relatos de uma maior incidência de infecção por hantavírus em homens e uma predominância na faixa etária de 45 a 64 anos (9).
O perfil de neutralização sugere fortemente a exposição ao PUUV ou a um hantavírus intimamente relacionado, em vez do DOBV relatado anteriormente na Itália (2,4–6). Os sintomas das infecções por PUUV e DOBV podem variar de assintomáticos a graves e muitas vezes incluem febre, dor de cabeça, dor abdominal, dor nas costas e náuseas, ocorrendo na ausência de sintomas respiratórios.1). Embora ambos os vírus possam causar HFRS, a doença associada ao DOBV é mais grave (5% a 10% de mortalidade), enquanto a infecção por PUUV é geralmente mais leve (<1% de mortalidade) (1), o que pode dificultar o reconhecimento clínico. Infecções por PUUV foram documentadas em países vizinhos da região alpina e da Europa Central (12–14) e considerando a continuidade dos ecossistemas florestais e a distribuição do rato-comum, a sua presença no norte de Itália é plausível. Embora o rato-comum, hospedeiro natural do PUUV, geralmente habite florestas, nossa área de estudo era em grande parte semi-urbana e agrícola, com florestas fragmentadas. A forma como a exposição humana ocorre em tais ambientes requer um estudo mais aprofundado. Digno de nota, um recente surto de PUUV na costa da Croácia (15) destaca a capacidade do vírus de ocorrer fora dos habitats típicos dos ratos-do-mato.
Nossos achados sorológicos em uma coorte de pacientes com doenças crônicas no norte da Itália demonstraram exposição a hantavírus e LCMV. A taxa de detecção de anticorpos contra hantavírus foi particularmente elevada, sugerindo transmissão local. Juntamente com relatórios anteriores da Itália, as nossas descobertas destacam que os vírus transmitidos por roedores, particularmente os hantavírus, são provavelmente endémicos para além das regiões actualmente reconhecidas. Devido aos dados limitados sobre infecções humanas, os hantavírus continuam a ser largamente subdiagnosticados e negligenciados em Itália. Embora as amostras mais recentes deste estudo datem de 2018, a detecção de anticorpos ao longo de vários anos de amostragem sugere exposição contínua nesta região. Mais estudos em roedores e humanos são necessários para identificar espécies endêmicas de hantavírus e para avaliar melhor os riscos associados e a carga da doença. Aumentar a conscientização dos médicos sobre as formas leves de HFRS, como a nefropatia epidêmica, e fornecer acesso a diagnósticos laboratoriais apropriados são essenciais para a detecção e confirmação oportuna de infecções. Mensagens de saúde pública seriam essenciais para minimizar a exposição a roedores e aos seus excrementos, ajudando a prevenir doenças transmitidas por roedores em toda a Itália.
Dr. Faoloto é médico afiliado ao Hospital Universitário de Novara, Itália, onde combina a prática clínica com a pesquisa científica. Seu trabalho inclui contribuições para a pesquisa e epidemiologia de doenças infecciosas, com ênfase no avanço do conhecimento clínico e no atendimento ao paciente.
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